细胞培养操作说明

复苏

1.从液氨中取出细胞冻存管，快速将其置入 37°水浴中解冻直至冻存管中无结晶，75%的酒精擦拭冻存管外壁:

2.将冻存管中的细胞移至含 6m 培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min;

3.弃上清，沉淀用 6ml培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37°C，5%CO2 细胞培养箱中培养

传代:

(1) 贴壁细胞:

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次。

2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1m 至培养瓶中，倒置微下观客，待细胞回缩变圆后加入 5m 培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬浓移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min;

3. 弃上清，沉淀细胞用 1-2m 培养基重悬，按1:2 比例进行分瓶传代，补加培养基后放入 37，5%C02 细胞培养箱中培养

   
   

(2) 悬浮细胞

待细胞达到1x10^6/ml左右可按照以下方法换液培养或传代

方法1:收集细胞，1000rpm 离心 5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1: 2到 1: 3的比例分到合培养基的新中.

方法2:竖立放置培养瓶，细胞沉淀后弃去上半量培养基，将细胞悬液按 1: 2 到 1: 3 的比例分到含培养基的新瓶中.

冻存:

1.离心收集细胞并进行计数(参考离心条件: 1000rpm，5 min)。移去离心管中的上清液

2.加入适量的无血清细胞冻存液(EK-Bioscience 货号: S002) 于离心管中，调整细胞浓度至1~5x10cells/L。轻柔混，制成细胞冻存悬液

3将离心管中的细胞冻存悬液分装于已标示的冻存管中:

4.直接将含细胞悬液的冻存管放入-80C冰箱，长期冷冻保存或转入液.