转染方法和技术

转染是一种常见的实验室细胞培养技术，用于许多研究领域、药物发现和开发。 体外转染是指将货物分子（例如核酸 – DNA或RNA）输送到培养的细胞（通常是癌细胞系）中。 体内 转染是指将货物分子（如治疗性 siRNA、质粒 DNA、小蛋白等）递送至靶组织。有针对 体外 和 体内 转染优化的市售转染产品，以及生物 CRO 提供的转染服务经过 GLP 认证，可以根据 FDA 的要求进行这些临床前实验。

转染方法包括通过非病毒技术进行的各种方法（物理和化学方法）——电穿孔、磷酸钙暴露、基于脂质体的转染，允许通过细胞膜递送货物分子而不会对细胞造成长久的损伤。下面描述了几种化学转染方法。

化学转染方法

由于可供购买的转染试剂简单、成本高且种类繁多，化学转染是一种流行的技术。瞬时转染通常用于持续数天的所需基因的短期表达。研究应用包括基因表达研究、基因沉默研究和重组蛋白分析。

化学转染实验的工作流程在各种细胞类型中都很常见。这包括在亚汇合处接种细胞，在转染前立即制备转染试剂/DNA 复合物，然后评估构建体的表达。细胞培养基在接种细胞后一天更新，然后在转染后几小时更新。必须对转染方案进行优化，以确保高转染效率，并且该方法对被转染的细胞无毒。

脂质体转染是使用脂质体的转染，脂质体是可以与细胞膜融合并能够释放其内容物的小分子。脂质体可以是基于脂质的（更常见），也可以是基于非脂质的。带正电荷的阳离子聚合物与带负电荷的核酸结合良好，是另一种转染方法。脂质体转染方法在新药发现和开发中有多种常见应用，尤其是在肿瘤学中，其中的应用包括通过基于小分子的药物靶向特定基因（例如致癌基因）或使用 RNAi 技术进行基因沉默。

物理转染方法

电穿孔和细胞注射（例如基因枪）是物理转染方法的两个经典例子，它们能够完成核酸的递送，但由于细胞膜的破坏而对细胞很苛刻并且经常导致细胞死亡。对于传统上难以转染的细胞来说，这是一个合适的选择。物理转染涉及电穿孔、显微注射和基因枪粒子递送。

电穿孔取决于 DNA 浓度和所用细胞的类型。传统的电穿孔需要使用电穿孔比色皿。许多公司销售的电穿孔系统与从原代细胞和干细胞到原核细胞和哺乳动物细胞的细胞类型兼容。

显微注射通常用于将 DNA 和 RNA 引入单个细胞，例如胚胎干细胞。借助显微操作器和显微镜，DNA 或 RNA 直接插入细胞质或细胞核。这通常很耗时，但会产生非常高的转染效率。

基因枪颗粒递送依赖于携带核酸的微粒将 DNA 或 RNA 引入细胞。一种快速的方法，将这些颗粒射入细胞，但缺点是细胞死亡率很高。

转染方案和实验细节

虽然转染是一种非常广泛和有用的技术，但它对被转染的细胞类型具有高度特异性。一些细胞更适合转染，而另一些细胞则不适合，因此一些细胞对某些转染试剂更敏感。细胞系的广泛多样性和与每个细胞系相关的具体细微差别需要一本教科书来充分描述，但值得庆幸的是，转染试剂可以帮助实验发挥作用，而无需进行广泛的背景研究。许多公司开发了专门针对特定细胞类型优化的转染试剂，从而确保基因编辑实验的最大效率。

在设计转染实验时，了解转染的最终目标尤为重要；稳定表达需要与瞬时转染不同的设置，因此，应调整实验方案。如果时间紧迫，那么转染实验可以外包给可靠的公司，这些公司可以保证为研究应用开发稳定或瞬时细胞系。

Altogen Biosystems 的体内转染试剂 

RNAi 已用于使用动物模型的体内目标验证研究。在体内进行 RNAi 研究的主要挑战是将功能性小 RNA 分子有效、定向地递送到特定组织中。 Altogen® In Vivo Transfection Reagents 可以与 siRNA（或 microRNA）结合，并通过瘤内 (it) 或通过静脉 (iv) 尾静脉注射进行全身给药，以在特定组织（包括肝脏、胰腺、肾脏和肿瘤。早在注射后 24 小时就可以看到选择性击倒。

Altogen Biosystems 的特色体内转染产品：  

体内纳米颗粒转染试剂盒 || 体内脂质转染试剂盒 || 体内胰腺靶向转染试剂盒     

Altogen Custom Services 提供专业的生物技术和制药服务，包括60 多种经过验证的异种移植模型、稳定细胞系的开发、RNA 干扰 (RNAi) 服务、分析开发、ELISA 和蛋白质印迹服务、siRNA 文库筛选和转染服务。稳定表达细胞系的生成可能非常昂贵且耗时。Altogen Labs 提供仅需 28 天即可完成的稳定细胞系生成服务。  

转染方法和细胞转染技术

细胞转染是一种实验室技术，用于将核酸（例如 DNA、RNA 或 siRNA）输送到细胞中以修饰其基因表达或研究基因功能。该技术涉及使用转染试剂将核酸引入细胞，这有助于它们进入细胞。

细胞转染通常包括以下步骤：

1. 转染试剂的选择：研究人员选择与被转染的细胞类型和被递送的核酸类型兼容的转染试剂。

2. 核酸的制备：通过从天然来源分离它们或在实验室中合成它们来制备核酸。

3. 转染复合物的形成：核酸与转染试剂混合形成可进入细胞的复合物。

4. 细胞转染：将转染复合物加入细胞中，孵育细胞，使核酸进入细胞。

5. 转染效率分析：通过使用 PCR、蛋白质印迹或荧光显微镜等技术测量递送核酸的基因表达水平来评估转染效率。

细胞转染是研究基因功能和开发遗传疾病或癌症新疗法的宝贵工具。然而，转染的效率和特异性会受到多种因素的影响，包括转染试剂的选择、被转染的细胞类型和实验条件。因此，仔细优化转染条件和适当的控制对于确保转染实验的可靠性和可重复性非常重要。