我可以用什么来纯化极性反应混合物？

使用快速色谱法纯化极性反应混合物可能是一个真正的挑战。传统的正相闪蒸需要有毒的二氯甲烷 (DCM) 或氯仿与甲醇进行此类纯化，这可能会产生不可预测且通常不希望的结果。这些相同的化合物通常极性太大，无法保留在反相色谱柱上并在溶剂前沿（在单柱体积或 CV 内）洗脱。如果您遇到其中一个问题，称为 HILIC 的技术可能是解决方案。

那么，您可能会问自己什么是 HILIC？ HILIC是亲水相互作用液相色谱法。 这是一种用于分离和纯化极性化合物的技术，这些化合物在反相上不保留和/或对于正相来说极性太大。

一些化学家称这种技术为反相反相色谱，但实际上它是水性正相色谱。与正相一样，HILIC 使用极性固定相柱（硅胶、二醇、胺等）。然而，对于 HILIC，较弱的溶剂通常是乙腈，而强溶剂是水。如您所知，甲醇通常不适用于 HILIC 分离。

直到最近，我执行过的 HILIC 色谱法是在 20 世纪 80 年代我在另一家公司工作时开发的硅胶快速柱 QC 测试（尿嘧啶 + 胞嘧啶在醋酸铵水溶液中）和糖分离。

然而最近，我遇到了一种反应混合物，传统的正相或反相都无法有效纯化，所以我尝试了HILIC。令我高兴的是，这效果很好。

当我尝试纯化烟尿酸与苄胺反应的产物时，就出现了对 HILIC 的需求。虽然我能够通过反相进行一些分离，但我的产品未能很好地从一些副产物中分离出来，这使得我的目标分离具有挑战性，图 1。

图 1.反相快速色谱分离效果不太理想。

由于反应混合物仅溶于极性溶剂，正相提供的选择有限。我勉强尝试使用硅胶柱使用 DCM-MeOH (0-30%)，并实现了良好的分离，尽管放大纯化的空间很小，图 2。

图 2.正相快速色谱分离效果良好，但分辨率有限。

然后，我尝试使用硅胶柱（5 克 Biotage® Sfär HC）和 0-30% 乙腈水梯度进行 HILIC。这种方法提供了满足我需求的最佳结果，解决了我的产品与副产品的问题，图 3。

图 3. HILIC 快速色谱提供了产物和副产物之间的最佳分离效果和出色的分辨率。

HILIC 比传统正相快速色谱法具有优势。正相技术使用危险、有毒的有机溶剂和一次性塑料柱，不是一种环保技术。另一方面，HILIC 确实使用乙腈，但强溶剂是水，产生危险性较小的废物流。 HILIC 还允许硅胶柱在一定程度上重复使用（取决于粗反应混合物的纯度）。在处置之前，我已将硅胶柱重复用于 HILIC 应用 4 到 5 次。