怎样使用Trypan blue进行细胞计数？

生物学家可以利用多种仪器和消耗品检测来探索总体细胞计数和细胞活力。血细胞计数法是手动细胞计数的传统工具，Trypan blue是医学和生命科学实验室中使用普遍的细胞排除染料之一。然而，排除染料台盼蓝仍然是细胞计数应用的关键组成部分，而过时的血细胞计数器已逐渐被 DeNovix CellDrop™ 等创新型自动细胞计数器所取代。

 即使是基于载玻片的自动化细胞计数也无法与 CellDrop DirectPipette™技术建立的标准竞争 ，该技术可以提高台盼蓝等排除染料的功效。

Trypan blue是主要的细胞排除染料之一，用于区分溶液中的活细胞和死细胞，以计算总体活力。它通过渗透受损细胞膜并与细胞内蛋白质结合来对死细胞进行染色，从而产生深蓝色外观。这篇文章将更深入地探讨台盼蓝细胞计数的一般原理和局限性。

概述Trypan blue细胞计数

Trypan blue是一种偶氮染料，用作多种排除染色剂之一，用于测量悬浮液中活细胞的数量，利用活细胞膜抵抗某些化学染色剂渗透的原理。用台盼蓝检测的细胞悬浮液将理想地显示具有透明细胞质（活细胞）和蓝色细胞质（死细胞）的细胞。这有利于使用光学显微镜进行简单的细胞计数。

典型台盼蓝细胞计数测试的一般程序如下：

• 将微量 (μl) 细胞悬浮液和 0.4% 台盼蓝染料在蛋白质缓冲系统 (PBS) 中混合，以达到所需的比例并使测定的样品均质化。

• 在室温下孵育适当的时间，以确保准确测量细胞活力。

• 可选：在细胞计数之前进行颗粒化和重悬，并根据需要过滤以去除溶液中的聚集物。

• 将微量样品移入血细胞计数器的计数区域、细胞计数一次性玻片上，或直接移至 CellDrop 的光学计数室中。

• 使用血细胞计数器的网格线手动计数染色和未染色的细胞，或在自动细胞计数系统上运行适当的软件，以自动获取准确的活力测量值。

台盼蓝细胞计数的局限性

尽管Trypan blue被广泛用于细胞计数和活力测试，但它也存在局限性，这使得传统测量变得复杂。例如，与血清蛋白相比，Trypan blue对细胞蛋白的亲和力降低，可能会为细胞形态的可视化创造具有挑战性的条件。这可能需要对样品进行分析，然后将其重新悬浮在额外的无蛋白质缓冲液中，然后才能进行细胞计数。