laebio检测试剂盒:Sumoylation Control Kits简述

该检测试剂盒包含用于常规检测苏酰化活性的试剂。包含苏酰化标记（人拓扑异构酶 I 蛋白），以便清晰地检测反应。该测定已被证明适用于粗提物。强烈建议人 EI，活性 (Cat# P001；P006)、人 E II，活性 (Cat# P002；P011) 和人 SUMO I，活性 (Cat# P003；P012) 与该试剂盒一起使用。

K007 套件包含：

• SAE I 和 SAE II（人类 EI）（目录号 P006）

• UBC9（人类 E II）（目录号 P011）

• SUMO I（主动形式）。 （目录号 P012）

• 人类 DNA 拓扑异构酶 I 片段。 （目录号 B007）

• 抗拓扑异构酶 I 抗体。 （目录号 AP006）（冻干抗体应在使用前用 100 ul H ₂ O 复溶。）

• 10X 苏酰化反应缓冲液。 （目录号 B006）（10x 缓冲液含有 200 mM Hepes pH 7.5、50 mM MgCl ₂和 20 mM ATP。）

上述试剂适用于50次苏酰化反应。

测定条件：
苏酰化测定在含有20mM Hepes pH 7.5、5mM MgCl ₂、2mM ATP的反应缓冲液中以20ul的终体积进行。我们建议添加新鲜的 2mM ATP 以确保提供足够的能量。

拓扑异构酶 I 苏酰化控制方案：

1. 添加 2 ul 50 kd 拓扑异构酶 I 片段（目录号 B007）作为每个反应的底物。

2. 在每个反应中，首先将 2 ul E2 添加到底物中，然后添加 2 ul Sumo-1、2ul 10x 反应缓冲液（目录号 B006）、2ul E1 和 2 ul 20 mM ATP。最后，添加 H ₂ O 使总体积达到 20 ul 。

3. LAE SUMO化蛋白的最佳反应浓度如下：      对照测定的推荐条件是37 ^℃，30~60分钟。
   
   

• EI：7.5微克/毫升

• E II：50微克/毫升

• SUMO-1：50微克/毫升

4. 使用 10 ml 中提供的拓扑异构酶 I 抗体（目录号 AP006）稀释 1000 倍进行蛋白质印迹。应检测四个主要的SUMO化条带。

使用 Topo-I 抗体（目录号 AP006）对苏酰化 50 Kd Topo-I 蛋白（目录号 B007）进行蛋白质印迹（12.5% 凝胶）。泳道 1：sumoylated 50Kd Topo-I 片段；泳道 2：未苏酰化的 50Kd Topo-I 片段。

Topo-I 抗体 ( Cat#AP006)可以检测到至少四个主要的苏酰化 Topo-I 片段 。

苏酰化方案：

1. 准备合适的纯化底物蛋白。

2. 在每个反应中，首先将 2 ul E2 添加到底物中，然后添加 2 ul Sumo-1、2 ul 10 x 反应缓冲液、2 ul E1 和 2 ul 20 mM ATP。最后，添加 H ₂ O 使最终体积达到 20 ul。

3. LAE蛋白的最佳反应浓度如下：

• EI：7.5微克/毫升

• E II：50微克/毫升

• SUMO-1：50微克/毫升

运输/储存：
该套件随干冰一起运输，应储存在 -70 ^o C 或更低的温度下。  

法律考虑：仅供研究使用。

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