细胞库实践综合指南

细胞培养的有效管理对于保持其在研究和治疗应用中的完整性至关重要。细胞系的连续或长期培养会导致各种并发症，例如:

• 微生物污染:

  开放培养容易受到各种微生物感染，这些微生物会改变细胞行为和生存能力。

• 特征变化:

  关键的细胞特征，如抗原表达或抗体产生，可能会随着时间的推移而丢失。

• 遗传变异:

  基因组不稳定性可能发生在以核型不稳定而闻名的细胞系中，从而导致不可靠的实验结果。

• 寿命限制:

  某些类型的细胞在进入衰老和停止增殖之前分裂次数有限。

• 交叉污染风险:

  长期培养增加了一个细胞系污染另一个细胞系的风险，从而导致错误的数据。

• 资源密集度:

  长期培养需要更多的消耗品和劳动力，大大增加了成本。

细胞库的战略方法

细胞库系统是减轻上述风险的战略方法。推荐的系统是主小区银行系统，包括以下步骤:

1. 初始隔离:

   新获得的细胞培养物应在严格的检疫条件下隔离和处理，以防止实验室污染。

2. Token Stock Establishment:

   初始培养扩增后，应冷冻保存少量安瓿瓶（3-5瓶）作为应急备用的象征性储备。

3. 主细胞库形成:

   从代币储备安瓿瓶扩大培养物，以建立由大量安瓿瓶组成的主细胞库（10-20个或更多，根据计划使用情况而定）。

4. 严格的质量控制:

   主细胞库的一个子集经历了全面的质量控制测试，其中包括评估细胞活力，确认不存在微生物污染物，并可能进行病毒和真实性测试。

5. 工作细胞库的开发:

   然后使用主细胞库的一部分创建工作细胞库，这是积极研究和应用的主要来源。

详细的质量控制协议

质量控制是维护细胞库的关键部分。它包括:

• 生存力和计数测试:

  确保细胞存活且数量充足。

• 微生物筛选:

  定期检测细菌、真菌和支原体以防止细胞培养受损。

• 认证程序:

  通过DNA分析等方法确认细胞系的身份。

存储和使用建议

正确的储存条件如下:

• 专用存储设施:

  利用专门为储存细胞库设计的设施，如液氮罐或电冰柜，以防止交叉污染并确保长期生存能力。

一致性和质量保证:

• 一致的细胞材料:

  细胞库系统确保实验中使用的所有材料都来自一致的来源。

• 受控通道数:

  通过使用在可控传代次数范围内的细胞，实验可变性被最小化。

• 适时文化实践:

  仅在必要时培养细胞有助于保持细胞系的原始特性，并降低与保持连续培养相关的成本。