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细胞计数和细胞活力测量对于许多不同样品类型的广泛研究应用至关重要。治疗和医学研究细胞计数过程包括血液测量，如红细胞计数、白细胞活力检测和树突状细胞监测。可以使用血球计数器进行计数，但手动计数的不准确和耗时性可能非常有限。使用自动细胞计数仪可获得最佳结果，但仍需要考虑一些最佳实践，以确保结果准确且可重现。无论您是手动计数细胞，还是使用 CellDrop™ 自动细胞计数仪等自动化系统，这都适用。
对于每种细胞计数方法，样品表面必须清洁。任何污染都可能导致结果不准确。手动细胞计数包括移除和清洁玻璃盖玻片，然后用 70% 乙醇和水清洁计数室。使用一次性塑料载玻片时，每个样品（如果载玻片有两个腔室，则为一对样品）都需要一张新的载玻片。
使用 CellDrop 系列仪器，腔室在两个彼此平行的光学级蓝宝石表面之间形成。样品在表面之间移液，并通过表面张力固定到位。要清洁表面，只需用干燥的实验室湿巾擦拭即可。
如需进一步清洁，用 15 μL 70% 乙醇或 10% 漂白剂冲洗腔室。加载后，让溶液静置 ~10 秒，然后用实验室干抹布清洁表面。
在加载样品之前立即混合对于确保分析样品的代表性至关重要。
不同大小和类型的像元将以不同的速率沉降和聚集。在上样前立即混合溶液可增加等分试样均匀并准确反映细胞培养物特性的可能性。
细胞计数需要分析整个储备液中的少量样品，因此必须注意确保样品具有原始储备培养物的代表性。虽然像 CellDrop 这样的细胞计数仪应用算法来识别团块中的细胞，但它们无法校正不具有代表性的样品。手动计数时，团块的评分比单个细胞更主观，这增加了用户之间的可变性。
细胞裂解后的细胞外 DNA 和细胞碎片是结块的常见原因。细胞裂解可能是由过度生长、过度移液造成的机械剪切、冻融循环以及胰蛋白酶消化不足或过度引起的，也可能导致样品异质性。通过避免细胞裂解的原因和过滤样品中的细胞碎片，可以减少细胞团块。
无论是手动计数还是依靠软件算法进行计数，调整对焦和曝光设置以确保细胞的最佳可见性以获得最准确的结果都很重要。
最佳对焦和曝光将显示细胞膜和背景之间的鲜明对比。
针对荧光应用单独优化每个荧光通道的能力将产生最可重现的结果。应设置荧光强度以确保细胞在保持其实际大小的同时尽可能明亮。光线不应渗过细胞的边缘。
有一系列血球计数器可供选择，深度和网格设计各不相同。请注意在计算中使用正确的详细信息以避免错误。
CellDrop 具有一定的功能，与其他基于玻片的计数仪相比，可实现更宽的细胞密度范围。装载室高度可通过软件进行调整，以适应最宽的细胞密度和粒径范围。提供屏幕指导以确保最佳高度，并自动调整计算。
大多数自动细胞计数仪都包含可调整的设置，以最好地匹配正在研究的细胞。例如，可以设置并保存像元大小范围，以从分析中排除碎片或其他像元群。
还提供了用于定义单元格形状的设置。对于 CellDrop，可以在细胞计数之前或之后调整设置，并根据新参数重新分析数据。
明场分析可有效计数培养的哺乳动物细胞。然而，使用台盼蓝可能很难区分活细胞和死细胞，并且对于许多原代细胞，需要荧光。
例如，外周血单核细胞 （PBMC） 通常与大量红细胞 （RBC） 混合，使用明场分析可能显示为“死亡"。然而，使用吖啶橙 （AO） 和碘化丙啶 （PI） 等染料，可以仅对有核 PBMC 进行染色，并使用双重荧光功能区分活体和死体。
AO 和 PI 都可以对核酸进行染色，但只有 AO 可以穿过活细胞膜。因此，活的 PBMC 用 AO 染色并发出绿色荧光，死的 PBMC 用 AO 和 PI 染色并发出红色荧光。红细胞未染色，根本不发出荧光。
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