试剂盒里有什么:

试剂盒含量(10个反应或25个反应):

TGIRT^® -III enzyme, 1 x 10  M l (KTGIRT-10) or 3 x 10  M l (KTGIRT-25)

10XPrimer混合物,50  M l (PM-110)

10 x DTT, 50  M l (D-121)

5x反应缓冲区,100  M l (RX-120)

• TGIRT^® -III enzyme ,a  RNA和DNA寡核苷酸的混合 （可退火 形成含有R2RNA/R2R异型基因的  第一个适配器序列 ,  dithiothreitol (DTT) ,以及  反应缓冲区 去执行 ^® 照明rnan及sdnaa-seq分析的模板转换应。 这个工具包能够与第一个rna-后续适配器无缝连接到cDNA的5'端,合成rna模板的cDNA副本。为香港及香港的  DNA寡核苷酸 (单独购买)  第二组子适配器序列 必须加到CDNA的3'端  5'微生物/RNA连接酶 (新英格兰生物学家;M019或M0319L)在PCR扩增之前。

可以做什么实验？

1.全面的链特异性转录组分析。8

2.全细胞、胞外体、血浆和其他无细胞RNA的RNA序列7，8，15

3.miRNA、tRNA和其他非编码小RNA的分析1-9，12，15

4.RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP和CRAC用于表征RNA-蛋白质相互作用和核糖体图谱。1，10，115

5.通过高通量测序鉴定RNA碱基修饰。4，5，13，14

6.单链DNA-序列16

7.FFPE肿瘤样本分析(咨询InGex技术支持)。

以下是您应该使用TGIRT的原因:

比逆转录病毒逆转录酶具有更高的热稳定性、持续能力和保真度，允许从高度结构化和/或高度修饰的RNAs(例如tRNAs)和含有富含GC重复扩增的RNAs进行全长、端到端的cDNA合成。1-9，12，15，17
新的端到端模板转换活性，能够在逆转录过程中连接RNA-seq或PCR接头，并且不需要单独的拖尾或RNA 3’-接头连接步骤。1与使用随机六聚体引物或使用RNA连接酶进行接头连接的程序相比，这种模板转换活性极大地促进了链特异性RNA-seq文库的构建，偏差更小。1，7，8
能够从低至2 ng的RNA输入中产生全面的图谱。7，15
从RNA模板到PCR产物的RNA-seq文库构建需要不到5小时。7，8，15
TGIRT更适合通过tgi rt-模板转换构建RNA-seq文库:

1.全面的链特异性转录组分析。

去核糖的片段化通用人类参考RNA样品的TGIRT -seq概括了人类转录物和刺突蛋白的相对丰度，与非链特异性TruSeq v2相当，且优于链特异性Tru-Seq v3。TGIRT -seq比TruSeq v3具有更强的链特异性，并消除了TruSeq固有的随机六聚体引发的取样偏差。与TruSeq相比，TGIRT -seq显示了更均匀的5’至3’基因覆盖范围，并识别了更多的剪接点。TGIRT -seq能够在相同的RNA-seq中同时分析mrna和lncRNAs，作为结构化的小ncRNAs，包括trna，它们基本上不存在于TruSeq数据集。8

2.人类全细胞、胞外体、血浆和其他细胞外RNA序列。

快速处理时间(通过PCR步骤构建RNA-seq文库< 5小时)；需要少量RNA(低ng范围)；全面的转录谱，包括mRNAs和lncRNAs以及小ncrna，包括tRNAs、前miRNAs和其他结构化小ncrna的全长阅读；不需要RNA连接酶；与常规方法相比，偏差更小，效率更高，链特异性更强。7，8，15

3.高度结构化和/或高度修饰的RNA模板的RNA-seq。

更高的热稳定性、持续加工性和链置换使得获得tRNAs和其他结构化/修饰的小ncRNAs的全长、端到端cDNAs成为可能，这些小ncRNAs对逆转录病毒RTs.4-9，12-15是不可抵抗的。

4.在诸如RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP、CRAC、核糖体分析等方法中通过TGIRT模板转换构建RNA-seq文库。

快速处理时间(通过PCR步骤构建RNA-seq文库< 5小时)；需要少量RNA(低ng范围)；不需要RNA连接酶，操作步骤更少，偏差更小，效率更高。1，10，11

5.人血浆和大肠杆菌基因组DNA的ssDNA序列。

通过直接在DNA链的3’端启动DNA合成，同时连接DNA-seq衔接子，无需末端修复、加尾或连接，以更简单的工作流程捕获精确的DNA末端。能够分析核小体定位、转录因子结合位点、DNA甲基化位点和来源组织。

上海牧荣生物科技有限公司

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