mediomics：Bridge-It PDE检测试剂盒：Bridge-It® cAMP-磷酸二酯酶 (PDE) 检测试剂盒，96 孔格式 

Bridge-It® cAMP 磷酸二酯酶 (PDE) 测定是一种基于荧光的高通量筛选 (HTS) 方法，用于测量纯化来源的环核苷酸磷酸二酯酶活性并确定其抑制剂的 IC 50。该测定基于 Bridge-It® cAMP 多合一荧光测定（Mediomics，目录号 122938）的形式。

应用：

• PDE相关药物发现项目

• 心、肺（即COPD）、血小板功能和炎症机制的研究

• 焦虑症或神经退行性疾病的研究

特征：

• 简单： 将测试样品或标准品与测定溶液混合并在 ~25°C 下孵育

• 快速： 孵育 30 分钟后读取荧光信号

• 灵活： 检测方法适用于低通量和高通量筛选形式

cAMP、PDE 和 Bridge-It 荧光测定的背景信息

3',5'-环单磷酸腺苷 (cAMP)

3',5'-环单磷酸腺苷 (cAMP) 是重要的第二信使，参与多种生物过程的调节。 cAMP 的测量在新药发现中尤其重要，因为 cAMP 水平与新药发现的主要靶标之一——G 蛋白偶联受体 (GPCR) 的活性密切相关。用于测定 cAMP 浓度的 Mediomics 荧光 cAMP 测定方法基于上述测定平台设计。 CAP 是一种细菌 DNA 结合蛋白，其 DNA 结合活性取决于 cAMP 的存在，被用作测量 cAMP 水平的高度特异性生物传感器。当 PDE 将 cAMP 水解为 AMP 时，cAMP 浓度降低，从而导致 CAP-DNA 复合物形成减少，并与探针形成更多游离“半位点"双链体（未猝灭）。荧光信号的增加与 PDE 活性成正比。

Bridge-It® PDE 检测 – cAMP 标准曲线

以下 cAMP 标准曲线代表使用 Bridge-It® PDE 测定法制备的曲线。它显示了在 384 孔板中的缓冲液 B 中制备的标准曲线，并在添加 2X 检测溶液 30 分钟、1 小时和 2 小时后读取荧光信号。

Bridge-It® PDE 检测 – PDE 活性检测

以下 PDE 活性测定是使用 Bridge-It® PDE 测定制备的代表性测定。相对活性是在含有指示量的牛脑 PDE 的样品中测量的（Sigma，St. Louis，MO，目录号 P9529）。将反应在室温下温育30分钟并通过添加0.5ul终止溶液来终止。添加 2X 测定溶液，并在室温下孵育 40 分钟后读取信号。

Bridge-It® PDE 测定 – IC 50测定

以下测定是使用 Bridge-It® PDE 测定制备的代表性测定。使用来自牛脑的 0.8 mU PDE（Sigma，St. Louis，MO，Cat# P9529）和一定量的 IBMX（Sigma，St. Louis，MO）测量样品的相对活性。

注意：RA（相对活性）的定义位于协议第 8 页。 PDE 测定在标准 384 孔板中进行，最终 10 ul 反应液含有 1 x PDE 反应缓冲液（25 mM Tris，pH 7.4，100 mM NaCl，BSA 0.1 mg/ml，CaCl2 0.03 mM，钙调蛋白（Sigma， St. Louis, MO, Cat# P1431) 10 U/ml)，含有来自牛脑的 0.8 mU PDE (Sigma, St. Louis, MO, Cat# P9529) 和一定量的 IBMX (Sigma, St. Louis, MO) ）。将酶和 IBMX 混合并在室温下预温育 5 分钟。添加6 pmole cAMP，并将反应在室温下温育30分钟，并通过添加0.5ul终止溶液来终止。添加 2X 测定溶液，并在室温下孵育 40 分钟后读取信号。

研究用途： 仅供研究使用，不可用于诊断程序。

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