详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
土壤N乙酰βD葡萄糖苷酶(SNAG)测试盒
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-NAG是溶酶体中的一种酸性水解酶,由土壤微生物分泌。S-NAG活性变化与机体某些病理状态密切相关。
测定原理:
S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。
自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯5mL×1瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入10mL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体15mL×1瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定步骤:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
加样表
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.02 | 0.02 |
试剂一(μL) | 10 | 10 |
室温振荡混匀15min | 90℃振荡混匀15min | |
试剂二(μL) | 130 | |
蒸馏水 | 130 | |
试剂三(μL) | 160 | 160 |
混匀, 37℃振荡反应1h后,90℃水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,
10000g 25℃离心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列试剂)
上清液(μL) | 70 | 70 |
试剂四(μL) | 130 | 130 |
充分混匀,室温静置2min后, 400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-NAG活力计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.00645x -0.0054;x为标准品浓度(μmol/L),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-NAG活力(μmol/d/g 土样)= (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V反总÷W÷T =55.81×(ΔA+0.0054)
T:反应时间,1h=1/24d; V反总:反应体系总体积:3×10-4 L;W:样本质量,0.02g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0043x -0.0054;x为标准品浓度(μmol/L),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-NAG活力(μmol/d/g 土样)= (ΔA+0.0054) ÷0.0043×V反总÷W÷T =83.72×(ΔA+0.0054)
T:反应时间,1h=1/24d; V反总:反应体系总体积:3×10-4 L;W:样本质量,0.02g。
上海牧荣生物科技有限公司
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