细胞壁不溶性酸性转化酶（BAI）测试盒

细胞壁不溶性酸性转化酶（BAI）测试盒

微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，Ivr分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。

AI的最适pH为3～5。AI分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AI（B-AI）两种类型。B-AI存在于细胞间隙并结合在细胞壁上，主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解，以维持库源之间蔗糖的浓度。

测定原理：

B-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收增加速率与B-AI活性成正比。

自备用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液1：液体100mL×1瓶，4℃保存;

提取液2：液体100mL×1瓶，4℃保存;

试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存;

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存;

试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存；

粗酶液提取：

按照组织质量（g）：提取液1体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液1），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL蒸馏水，充分震荡混匀，12000g 4℃离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL提取液2 充分混匀，4℃浸提过夜，12000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测。

测定步骤和加样表：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至510nm，蒸馏水调零。

2、样本测定，（在EP管中依次加入下列试剂）：

混匀， 37℃准确水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，以防水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）

混匀，95℃水浴10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中， 510nm处记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)，ΔA=A测定-A对照。每个测定管设一个对照管。

B-AI活性计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。

（1）按蛋白浓度计算：

单位的定义：37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

B-AI活性（μg /min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

（2）按鲜重计算：

单位的定义：37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

B-AI活性（μg /min /g鲜重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0008x -0.001；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。

（1）按蛋白浓度计算：

单位的定义：37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

B-AI活性（μg /min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr

（2）按鲜重计算：

单位的定义：37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

B-AI活性（μg /min /g鲜重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001) ÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

上海牧荣生物科技有限公司

1. 国内试剂耗材经销代理。

2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

3. 提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。

4. 进出口货物代理服务。

5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式"服务模式，为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源，加强网络建设，提高公司内部运作效率，为客户提供方便、快捷的服务。

7. 公司突出创新思维，提高工作效能，减低运作成本，为客户提供优惠的价格。

细胞壁不溶性酸性转化酶（BAI）测试盒