详细介绍
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药 |
碱性木聚糖酶测试盒
微量法100T/48S
注意:正式测定之前选择2+3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业碱的原料细胞壁以及β+葡聚糖,降低酿造碱物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料碱的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业碱,BAX一般分离自最适生长pH为9 +11的微生物。
测定原理:
BAX在碱性环境碱催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5+二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
缓冲液:液体65mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。(若出现白色絮状或颗粒状沉淀,可60℃加热溶解后使用)。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
粗酶提取:
发酵液:发酵液于8000g,4℃,离心15min,取上清,作为待测样品。
酶干粉:称约0.1mg,加1mL缓冲液溶解待测。
组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL缓冲液)进行冰浴匀浆,然后8000g,4℃,离心10min,取上清待测。
测定操作表:
分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至540nm。
操作表
对照管 | 测定管 | |
样品(μL) | 60 | 60 |
缓冲液(μL) | 90 | 90 |
试剂一(μL) | 60 | |
试剂二(μL) | 90 | |
混匀,盖紧瓶盖,50℃水浴,反应30min,立即沸水浴10min灭活。(注意不要让盖子爆开,以免进水,改变了反应体系) | ||
试剂一(μL) | 60 | |
试剂二(μL) | 90 | |
混匀,沸水浴显色5min,取200µL于微量石英比色皿/96孔板中540nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管+A对照管。每个测定管设一个对照管。 |
BAX计算公式:
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 2.8432x - 0.0293,R2 = 0.9985
1. 按液体体积活力计算:
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106
= 391× (ΔA+0.0293)
2. 按蛋白浓度计算:
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
3. 按鲜重计算:
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力(nmol/min/g鲜重)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷W
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W
150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V反总÷V样=300µL÷60µL=5;
106:转化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 1.4216x - 0.0293,R2 = 0.9985
1. 按液体体积活力计算:
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106
= 782× (ΔA+0.0293)
2. 按蛋白浓度计算:
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr
= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
3. 按鲜重计算:
酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX活力(nmol/min/g鲜重)= (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106÷W
= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷W
150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V反总÷V样=300µL÷60µL=5;
106:转化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
注意事项:
1. 吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。
2. 试剂盒2+8℃保存,保质期3个月,建议尽快使用。
上海牧荣生物科技有限公司
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