| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | K61010 |
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| 供货周期 | 现货 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,制药 |
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MagVigen™ Streptavidin Conjugates Kit
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MagVigen链霉亲和素磁性纳米颗粒可以普遍结合任何生物素化的生物分子(例如抗体、蛋白质、肽、DNA)。MagVigen链霉亲和素-生物素-生物分子复合物可使用磁性架(目录号A20006)与未结合的生物素-生物分子轻松分离。这提供了一种用磁性纳米粒子标记生物分子的快速而简洁的方法。纯化的纳米粒子-生物分子复合物可用于多种下游生物分离过程(例如蛋白质纯化、免疫沉淀、细胞分离或去除以及分子检测。)
MagVigen链霉亲和素理想地与小鼠抗体一起用于从获自组织或器官的细胞群体混合物中分离细胞(例如CTCs、干细胞)。分离的细胞是活的，可以进一步培养或用于下游分子分析，如mRNA分离和RT-PCR。使用MagVigen纳米颗粒进行细胞分离无需使用色谱柱，因此细胞不会因通过色谱柱基质而受到机械应力的影响。磁性分离的细胞高度纯化，并保持其活力，是下游应用的理想选择。
mag vigen–链霉亲和素用于细胞富集的优势
- 简单快速地制备纳米颗粒-初级小鼠抗体缀合物
- 简单温和的细胞分离
- 强而持久的荧光信号
- 一致的高质量结果
- 高结合能力
- 高生物相容性
- 低非特异性结合
产品内容
Cat# K21005C还包括:
除磁铁外的所有材料都应储存在4°c下。
保质期:6个月
草案
细胞富集
该协议提供了浓缩10的一般指南5 -106使用MagVigen链霉亲和素磁性纳米颗粒的细胞。请根据具体应用调整试剂的量。
- 使用前，轻轻涡旋或吸取小瓶中的MagVigen链霉亲和素磁性纳米颗粒。
- 等份20-50 μl纳米粒子溶液用于富集实验。
注意: 20-50 μl通常足以富集105 -106细胞。细胞捕获效率可受多种因素影响，例如细胞群体中靶细胞的频率、细胞表面表达的抗原/表位的密度以及抗体亲和力。相应地调整纳米颗粒的量。
- 用500 μl洗涤缓冲液洗涤纳米颗粒两次。将磁铁放在试管侧面1-2分钟，将纳米颗粒从溶液中分离出来，并小心去除上清液(磁铁仍在侧面)。
- 向纳米颗粒中加入1μg-2μg生物素偶联的抗体(体积为100- 200 μl ),并在旋转器上孵育30-60分钟。
注意: 50 μl纳米粒子可以结合约2μg抗体。
- 用500 μl洗涤缓冲液洗涤纳米颗粒-抗体缀合物两次，以去除未结合的抗体。
- 将纳米颗粒-抗体缀合物重新悬浮于洗涤缓冲液(50 μl)中，并将其添加至细胞样品，总体积为0.1-0.5 ml。
- 在室温下，将纳米颗粒与细胞样品在轨道振荡器上孵育30分钟。
- 孵育后，使用磁铁将纳米颗粒(与细胞结合)从溶液中分离出来，并小心去除上清液。
- 用500μl细胞培养基洗涤纳米颗粒-细胞复合物两次。
- 分离的细胞可以重新悬浮在细胞培养基中用于下游应用。
注意: 洗脱缓冲液可用于从MagVigen链霉亲和素磁性纳米颗粒中洗脱目标蛋白质或细胞。
免疫沉淀
MagVigen纳米颗粒可通过免疫沉淀分析鉴定新的蛋白质-蛋白质相互作用，其中MagVigen链霉亲和素生物素-抗体复合物可用于从分析样品(如细胞裂解物)中分离特定的目标蛋白质或蛋白质复合物。免疫沉淀的蛋白质可以通过电泳、蛋白质染色和质谱进一步分析。MagVigen纳米颗粒比传统微珠小得多。这一特征使得纳米颗粒更容易接近抗原表位，并且对蛋白质或蛋白质-蛋白质复合物的天然功能干扰更少。此外，MagVigen纳米颗粒的表面经过的涂层处理，可减少与细胞蛋白质和其他生物分子的非特异性相互作用。该特征允许更具体地“下拉"真实蛋白质复合物靶。
纳米粒子清洗
为了获得纳米颗粒的最佳结果，建议在添加到样品之前清洗纳米颗粒。
- 涡旋MagVigen纳米颗粒10-20秒。
- 取50μl纳米粒子溶液，加入到100μl 1X洗涤缓冲液中，涡旋混合。
- 将磁铁放在试管侧面2-5分钟，将纳米颗粒从溶液中分离出来，并小心去除上清液(磁铁仍在侧面)。
注意: 在微量离心管的侧面应该可以看到含有深棕色纳米颗粒的透明沉淀物。
- 清洗纳米颗粒2次。
免疫沉淀
- 向含有细胞裂解物的试管中加入2 μg生物素抗体(或按照公司方案推荐的量)。
- 在冰上孵育一小时。
- 向试管中加入50μl预洗的MagVigen纳米颗粒。在4°c下旋转2小时
- 用磁铁将纳米颗粒从样品溶液(细胞裂解物)中分离出来。去除上清液。
- 用所用的50μl裂解缓冲液洗涤纳米颗粒3次。
- 最后一次清洗后，去除上清液，并向珠子中加入100μl洗脱缓冲液。
- 涡旋并孵育5分钟。
- 从溶液中磁性分离纳米粒子。收集上清液，同时避免干扰珠粒。目标蛋白质存在于上清液中，准备进行分析。
外来体隔离
- 使用前，轻轻涡旋或吸取小瓶中的MagVigen链霉亲和素磁性纳米颗粒。
- 等份50 μl纳米粒子溶液用于富集实验。
注意: 50 μl通常足以富集1-10×105外来体。外来体捕获效率可受多种因素影响，例如样品中外来体的频率、外来体表面表达的抗原/表位的密度以及抗体亲和力。相应地调整纳米颗粒的量。
- 用500 μl洗涤缓冲液洗涤纳米颗粒两次。将磁铁放在试管侧面1-2分钟，将纳米颗粒从溶液中分离出来，并小心去除上清液(磁铁仍在侧面)。
- 向纳米颗粒中加入500 ng生物素偶联的抗体(体积为100-200 μl ),并在旋转器上孵育30-60分钟。
注意: 50 μl纳米颗粒可以结合约200 ng的抗体。
- 用500 μl洗涤缓冲液洗涤纳米颗粒-抗体缀合物两次，以去除未结合的抗体。
- 将纳米颗粒-抗体缀合物重新悬浮于洗涤缓冲液(50 μl)中，并将其添加至细胞样品，总体积为0.1-0.5 ml。
- 在2°C±8°C的温度下，将纳米颗粒与预富集的外来体样品在轨道振荡器上孵育2小时或过夜
- 孵育后，用磁铁将纳米颗粒(结合有外来体)从溶液中分离出来，小心除去上清液。
- 用500μl洗涤缓冲液洗涤纳米颗粒-外来体复合物。
- 外来体结合的纳米颗粒现在准备用于外来体裂解、凝胶电泳和蛋白质分析。
MagVigen™ Streptavidin Conjugates Kit
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