Cre Recombinase, TAT-Cre (Tat-NLS-Cre, HTNC, HTNCr

Cre Recombinase, TAT-Cre (Tat-NLS-Cre, HTNC, HTNCre)

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Cre重组酶通常缩写为Cre，是一种I型酶拓扑异构酶来自P1噬菌体催化loxP位点间DNA的位点特异性重组。这种酶不需要任何能量辅因子Cre介导的重组底物和反应产物之间迅速达到平衡。loxP识别元件是一个34碱基对(bp)序列，由两个13 bp反向重复序列组成，侧翼是一个8 bp间隔区，提供方向性。重组产物依赖于loxP位点的位置和相对方向。含有单个loxP序列的两种DNA将会融合，而相同方向的loxP序列之间的DNA将以环状形式被切除，相对的loxP序列之间的DNA相对于其余的DNA是反向的。

Cre重组酶被用作修饰基因和染色体的工具。在这种方法中，Cre重组酶用于在实验动物中删除LoxP位点侧翼的DNA片段(也称为“floxed")。在许多转基因物种中，它已被用于产生具有仅限于某些细胞类型的突变(组织特异性敲除)的动物或具有可通过给药激活的突变(诱导性敲除)的动物。具有组织特异性或可诱导的Cre表达的转基因品系的可获得性允许研究人员简单地通过将固定的动物繁殖到预先存在的Cre转基因动物来灭活或激活感兴趣的基因。诱导型Cre重组酶系统的一个例子是Cre-ER (ER =雌激素受体蛋白)系统，其中腹腔内注射关于三苯氧胺会引起取决于剂量的切除固定位点(即使选择的基因失活)。

重组Cre重组酶(TAT-Cre)从携带工程质粒的大肠杆菌菌株中纯化，所述工程质粒编码来自噬菌体P1的增强形式的Cre重组酶。这种Cre重组酶具有一个N-末端6XHis标签、一个Tat肽(GRKKRRQRRRPPAGTSVSL)和一个NLS序列(PKKKRKV)。与其它形式的Cre重组酶(例如HNC、TCH6、HC、HNCM、CH)相比，HTNC是转导(体内)和随后重组中*有效的蛋白质。成纤维细胞报告细胞与1微米HTNC孵育1至2小时，可导致60 ~ 90%的细胞转化。向培养基中添加100微米氯喹可以进一步增强转导和重组。

应用程序

• 用于亚克隆或载体/克隆工程的体外LoxP重组

• 体外转导到包括干细胞的培养细胞中

性能：

浓度:2、5或10毫克/毫升。

分子量:43千道尔顿

QC: Tat-Cre在HEK293T- Cre报告细胞中诱导80~100%的重组效率。用报道质粒DNA: LoxP-RFP-Stop-LoxP-GFP转染HEK 293t-细胞，然后加入1个微米纯化的Tat-Cre蛋白。

图1: 0:添加Tat-Cre前；用Tat-Cre转导后1至5天。

内毒素水平:< 0.1欧盟单位/微克

通过SDS-PAGE和HPLC分析，纯度> 98%。

单位定义：100单位的标准被定义为在HEK 293T报道细胞系分析中诱导50% GFP表达所需的1.0 mL组织培养基中TAT-CRE的量(μg)。

稳定性：零下80度2年oC.零下20度6个月oC.最长3周，4oC

上海牧荣生物科技有限公司

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