Spermidine (SMD) ELISA Kit

预包被 96 孔微孔板

标准

标准稀释缓冲液

洗涤缓冲液

检测试剂 A

检测试剂 B

稀释剂 A

稀释剂 B

TMB 底物

停止解决方案

封板机

37°C 培养箱

多通道和单通道移液器以及无菌移液器吸头

喷瓶或自动洗板机

1.5 毫升管

蒸馏水

吸收性滤纸

100 ml 和 1 L 量筒

酶标仪（波长：450 nm）

ELISA 摇床

1） 标准品：用推荐体积的标准稀释剂缓冲液制备标准品，制成标准溶液。然后按照方案中的说明，使用标准稀释剂缓冲液对标准溶液进行连续稀释。

2） 洗涤缓冲液：按照实验步骤中的说明，用蒸馏水稀释浓缩的洗涤缓冲液。

3） 检测试剂制备：计算所需工作溶液的总体积。分别用稀释剂 A 和稀释剂 B 以 1：100 的比例稀释检测试剂 A 和检测试剂 B。

1） 设定标准、测试样品和对照孔。

2） 将 50 μl 稀释的标准品分装到标准孔中。

3） 将 50 μl 标准稀释液缓冲液分装到对照（零）孔中。

4） 将 50 μl 稀释样品分装到样品孔中。

5） 立即向每个孔中分装 50 μl 检测试剂 A。在 37 °C 下孵育 1 小时。

6） 洗涤 3 次。

7） 将 100 μl 检测试剂 B 分装到每个孔中。在 37 °C 下孵育 30 分钟。

8） 洗涤 5 次。

9） 将 90 μl TMB 底物分装到每个孔中。在 37 °C 下孵育 10-20 分钟。

10） 分装 50 μl 终止液。

11） 测量 450 nm 处的 OD。

使用前，将试剂盒组分和样品平衡至室温 （18 - 25 °C）。建议为每个测试绘制一条标准曲线。

1. 在预涂板上分别设置标准、测试样品和对照（零）孔，然后记录它们的位置。建议至少一式两份测量每个标准品和样品。

2. 将 50 μL 每种标准品、对照品和样品加入适当的孔中。

3. 取下盖子，丢弃液体。

4. 立即分装 50 μl 检测试剂 A 工作溶液。用盖子密封板，并在 37°C 下孵育 1 小时。

5. 取下盖子并丢弃溶液。用 1X 洗涤缓冲液洗涤板 3 次。

6. 向每个孔中加入 100 μL 检测试剂 B 工作溶液，密封并在 37°C 下孵育 30 分钟。

7. 弃去溶液，并按照上一步的说明用洗涤缓冲液洗涤板 5 次。

8. 将 90 μl TMB 底物分装到每个孔中。用盖子密封板，并在 37°C 下孵育 10-20 分钟。避免暴露在光线下。孵育时间仅供参考，最佳时间应由最终用户决定。不要超过 30 分钟。

9. 向每个孔中加入 50 μL 终止液。立即在 450 nm 处读取。