如何用纳米金标记核苷酸？

纳米探针在制备用于标记DNA，RNA和其他核酸的金标记试剂方面具有持续的研究兴趣。Monoamino Nanogold，Monomaleimido Nanogold和Mono-sulfo-NHS-Nanogold®®®都可用于标记核苷酸。对纳米金®试剂的特定反应性必须首先掺入所需标记位点的核苷酸中。这可以通过三种方式实现：

5'-用单氨基纳米金®标记（适用于所有寡核苷酸）:

首先，酶促去磷酸化5'末端。使用CDI（N，N'-羰基二咪唑）或EDC（1-乙基-3，3'-二甲氨基丙基碳化二亚胺）与磺基-NHS或咪唑将残留的磷酸基转化为反应性酯。将活化酯与单氨基纳米金®反应;它将通过酰胺键偶联，如 方案 1:

5'末端的硫醇化和单马来酰亚胺基纳米金®标记（适用于所有寡核苷酸）:

如上所述，用 CDI 或 EDC 去磷酸化和激活。如 Chu（参考文献 1）所述，与 2,2'-二硫双（乙胺）二盐suan盐（胱胺二盐suan盐）反应，或者用咪唑、胱胺和 EDC（参考文献 2）处理 5'-磷酸化核苷酸。用 0.1 M DTT 还原并与过量的 DTT 严格分离以生成游离硫醇，如 Ghosh 所述（参考文献 2）。如方案 2所示，用 Monomaleimido Nanogold® 标记生成的硫醇化寡核苷酸：

通过取代亚磷酰胺引入的反应性基团标记（用于合成寡核苷酸）:

使用市售的改性亚磷酰胺试剂在特定碱上引入受保护的胺或受保护的硫醇（这些试剂可从以下位置获得 克隆泰克 或 格伦研究).然后根据替代亚磷酰胺的推荐方案脱保护，并用单马来酰亚胺纳米金或单磺基-NHS-纳米金®®标记。

如果这些方法不适用于您的系统，您可以使用 带正电荷的纳米金®.该试剂用多种胺官能化，在中性或酸性pH下带正电荷。然后，它将静电结合到寡核苷酸带负电荷的磷酸基团。

或者，通过核苷酸的生物素化或在合成过程中掺入生物素修饰的亚磷酰胺，将半抗原（如生物素）引入寡核苷酸探针中。然后使用 纳米金®抗生物素（IgG或Fab'）或链霉亲和素.我们希望一旦其中一个抗体供应商开始以更实惠的价格携带未标记抗体，就立即推出金标记的抗digoxigenin。