用金纳米粒子标记： 分离和分离金纳米粒子偶联物

凝胶过滤是分离金纳米粒子标记结合物的最佳方法。

透析会产生更多变化的结果；在我们的实验室中，尝试通过透析将未结合的金纳米粒子与蛋白质和抗体结合物分离，导致金降解，有时还会导致蛋白质大量损失；因此，我们不推荐通过透析来分离偶联物。

膜离心可能有用，特别是在标记非常大的蛋白质时；截留分子量为 50,000 或 100,000 的微量浓缩器将允许 undecagold 和 Nanogold® 穿过膜。

选择您的凝胶过滤介质

选择一种凝胶，它可以最好地分离金结合物和过量存在的组分：这将是一种凝胶，其中结合物的 MW 接近 MW 分级范围的顶部，过量的试剂（无论是金纳米颗粒或未标记的较小分子）接近该范围的底部。注意：如果您担心聚集的可能性，请选择 MW 范围上限明显高于金纳米粒子偶联物 MW 的凝胶。

Nanogold® 标记的 Fab' 片段的分离示例如下所示：

所需产物（灰色阴影）与较大的 F(ab') ₂缀合物和过量未结合的 Nanogold® 分离。要获得更高的纯度，应将 12-14 级分合并并再次分离。

要对凝胶或印迹进行染色以获得清晰、快速的肉眼结果：

• 银增强方案：
  使用 LI Silver 对 Nanogold® 标记的分子进行凝胶染色

• 使用GoldEnhance Blots
  增强 黄金 在许多情况下，黄金显影剂优于白银。