抗体定量的最佳技术是什么？

抗体定量是可重复标记和可靠鉴定各种单克隆抗体类别的重要步骤。它提供了可操作的信息，包括特定应用的最佳稀释度、如何有效纯化特定抗体以及哪些细胞系将产生最有价值的结果。

评估总抗体浓度可能具有挑战性，因为根据用于纯化样品的技术，只有总计数的一部分包含活性抗原结合抗体。此外，分子科学家可以使用各种实验方法来进行抗体定量。那么哪种技术最好呢？

抗体终点滴定

滴定用于测量未知溶质的浓度。抗体浓度由终点指示，通常是溶液中跟随或等于等当点的颜色变化。尽管该技术有其优点，但抗体滴度可能会产生误导，特别是对于含有高浓度非活性或低亲和力抗体的样品。

酶联免疫吸附测定 (ELISA)

ELISA 试剂盒在很大程度上取代了湿化学实验室中的终点滴定，因为它们提供了更高的重现性和总抗体浓度的准确测量。它们的工作原理是抗体-抗原结合，允许使用与报告酶缀合的抗体对特定分析物进行准确定量，报告酶在添加到底物时会进行催化。同样，反应通常由颜色变化来指示。

传统的 ELISA 试剂盒通常被认为是临床诊断应用的金标准，但这种免疫吸附测定有多种形式，包括直接、夹心和竞争 ELISA 试剂盒。

然而，结果的精度通常基于单点插值，单点插值依赖于落在标准曲线内的样品稀释度光密度。

通过分光光度法进行抗体定量

分光光度法可以根据 280 nm 处的吸光度快速准确地进行抗体定量。通过 280 nm 处的分光光度吸光度进行抗体定量是一种简单且经济有效的方法。它提供了输入特定消光系数的机会，无需标准曲线或检测试剂即可获得准确的测量结果，并可以评估荧光标记抗体的染料掺入情况。此外，用户还可以使用 Bradford 或 Lowry 等比色测定法进行分光光度抗体定量。