jenabioscience:血液DNA制备-溶液试剂盒

Blood DNA Preparation - Solution Kit——基于溶液从全血中纯化基因组DNA

Jena Bioscience由Max-Planck-Institute of Molecular Physiology(Dortmund)的一组科学家于1998年成立，利用超过25年的学术知识为100多个国家的研究和行业客户开发创新试剂。

供一般实验室使用。

运输:在环境温度下装运

储存条件:在环境温度下储存

保质期:12个月

描述:
血液DNA制备试剂盒设计用于从全血样品中方便快速地分离基因组DNA。基于溶液的系统最大限度地减少了在基于旋转柱/过滤的方法中可能存在的DNA断裂。因为没有使用苯酚或氯仿，所以它是安全的，并且不会产生任何有害的废物。
基于溶液的基因组DNA纯化试剂盒保证了最小的DNA片段化，并产生最大150 kb的DNA。

预期收益率:
基因组DNA的产量因样品而异，取决于加工材料的数量、质量和类型。大约的数量。每次制备300 μl全血，可获得30-50 μg纯化的DNA。如果需要更大量的DNA，将制备物放大10倍是容易的。

内容:
红细胞裂解液
细胞裂解液
蛋白质沉淀溶液
洗涤缓冲液(使用前，按照瓶子上的指示添加96-99 %的乙醇)
DNA水合溶液

由您提供:
异丙醇(异丙醇)> 99 %
96-99 %乙醇
微管1.5或2.0毫升
65℃的加热块或水浴

准备程序:
开始前，提供> 99 %的异丙醇(2-丙醇)(不包括在套件中)。
对于S包(100包):将48毫升96-99 %的乙醇(不包含在试剂盒中)添加到清洗缓冲瓶中。

1细胞裂解:

• 用移液管将900 μl红细胞裂解液移至1.5 ml微管中，加入300 μl全血或骨髓，倒置10次。
• 在室温下孵育3分钟，偶尔倒置。请注意:对于制备前1小时内采集的新鲜血液，将孵育时间增加至10分钟，以确保红细胞*全溶解。
• 以15，000 g的速度离心30秒
• 用移液管移去上清液，留下可见的细胞沉淀。确保残留液体不超过20 μl。这是后续步骤中有效蛋白质和DNA沉淀的关键点。
• 用力摇晃试管10秒钟，使白细胞重新悬浮在残留液体中。白细胞沉淀应该*全重新悬浮。
• 向重新悬浮的细胞中加入300 μl细胞裂解液，并上下吸取以裂解细胞，直到看不到团块。
• 对于肝素处理的血液，在65°C下加热白细胞沉淀10分钟以促进溶解。

2蛋白质沉淀:

• 向细胞裂解液中加入100 μl蛋白质沉淀溶液。
• 剧烈涡旋20秒钟以充分混合。应该可以看到沉淀蛋白质的微小颗粒(没有结块)。
• 以15，000 g离心1分钟。
• 沉淀的蛋白质应该形成紧密的黑色颗粒。如果蛋白质沉淀不紧密，重复涡旋，然后在冰上孵育5分钟，再次离心。

3 DNA沉淀:

• 用移液管将300 μl浓度大于99 %的异丙醇移入干净的1.5 ml微量管中，并加入上清液。
• 轻轻倒置1分钟，混合样品。
• 以15，000 g离心1分钟。DNA应该是一个白色的小球。
• 在干净的吸水纸上简单地丢弃上清液和引流管。
• 加入500 μl洗涤缓冲液，翻转试管数次，以洗涤DNA沉淀。
• 以15，000 g离心1分钟。
• 小心丢弃乙醇，并在室温下干燥约10至15分钟。

4 DNA水合作用:

• 加入50-100 μl DNA水合溶液。
• 中速涡旋5秒钟以混合。
• 将样品在65°C下培养30分钟，以加速复水。
• 将DNA储存在4°C。对于长期储存，将样品放置在-20°C或-80°C

上海牧荣生物科技有限公司

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